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    研究發現:伯樂T100PCR儀的四點故障可能是這些原因導致的
    點擊次數:164 發布時間:2019-06-25
       研究發現:伯樂T100PCR儀的四點故障可能是這些原因導致的
      伯樂T100PCR儀現貨特點:
      節省編程時間:直觀的觸屏操作,使編程更為便捷
      快速優化實驗流程:溫度梯度功能確保在一次實驗中優化PCR條件,快速獲得好的結果
      節省實驗室空間:機身小巧緊湊,更堅固,便于安防
      先進的文件管理模式:個性化文件夾及USB閃存,易于保存和備份程序
      數據的高度一致性:性能穩定,升降溫速快,重復性高,結果可靠
      故障一:假陽性
      出現的伯樂T100PCR儀PCR擴增條帶與目的靶序列條帶一致,有時其條帶更整齊,亮度更高。
      引物設計不合適:選擇的擴增序列與非目的擴增序列有同源性,因而在進行PCR擴增時,擴增出的PCR產物為非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出現假陽性。需重新設計引物。
      靶序列或擴增產物的交叉污染:這種污染有兩種原因:一是整個基因組或大片段的交叉污染,導致假陽性。這種假陽性可用以下方法解決:操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣*內或濺出離心管外。除酶及不能耐高溫的物質外,所有試劑或器材均應高壓消毒。所用離心管及樣進*頭等均應一次性使用。必要時,在加標本前,反應管和試劑用紫外線照射,以破壞存在的核酸。二是空氣中的小片段核酸污染,這些小片段比靶序列短,但有一定的同源性??苫ハ嗥唇?,與引物互補后,可擴增出PCR產物,而導致假陽性的產生,可用巢式PCR方法來減輕或消除。
      故障二:出現非特異性擴增帶
      伯樂T100PCR儀PCR擴增后出現的條帶與預計的大小不一致,或大或小,或者同時出現特異性擴增帶與非特異性擴增帶。非特異性條帶的出現,其原因:一是引物與靶序列不完全互補、或引物聚合形成二聚體。二是Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低,及PCR循環次數過多有關。其次是酶的質和量,往往一些來源的酶易出現非特異條帶而另一來源的酶則不出現,酶量過多有時也會出現非特異性擴增。其對策有:必要時重新設計引物。減低酶量或調換另一來源的酶。降低引物量,適當增加模板量,減少循環次數。適當提高退火溫度或采用二溫度點法(93變性,65左右退火與延伸)。
      故障三:出現片狀拖帶或涂抹帶
      PCR擴增有時出現涂抹帶或片狀帶或地毯樣帶。其原因往往由于酶量過多或酶的質量差,dNTP濃度過高,Mg2+濃度過高,退火溫度過低,循環次數過多引起。其對策有:減少酶量,或調換另一來源的酶。減少dNTP的濃度。適當降低Mg2+濃度。增加模板量,減少循環次數。
      故障四:母鏈結合
      當PCR反應加熱至90-95左右時,會使模板DNA產生變形,解開為單鏈,當退火冷卻至55-60左右時,因為引物分子量較小,運動速度較快,和母鏈碰撞的機會很多,所以退火時引物優先會與母鏈相互結合。引物如果太大,會導致退火時無法激發模板,即引物無法優先與模板鏈相互結合,而是與較多的互補模板鏈相互結合。所以引物不能太大,一般不可以超過30個脫氧核苷酸的長度。
      以上便是今天關于研究發現:伯樂T100PCR儀的四點故障可能是這些原因導致的全部分享了,希望對大家今后使用本設備能有幫助。
     

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